1 與氣相色譜相比液相色譜的優(yōu)點(diǎn)：液相色譜法不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性及相對(duì)分子質(zhì)量的限制，只要求把樣品制成溶液即可，非常適合于分離生物大分子、離子型化合物，不穩(wěn)定的天然產(chǎn)物以及其他各種高分子化合物等。此外，液相色譜的流動(dòng)相不僅起到使樣品沿色譜柱移動(dòng)的作用，而且與固定相一樣，與樣品分子發(fā)生選擇性的相互作用，這就為控制和改善分離條件提供了一個(gè)額外的可變因素。而氣相色譜法采用的流動(dòng)相是惰性氣體，對(duì)組分沒有親和力，僅起運(yùn)載作用。

2 流動(dòng)相使用前必須脫氣。常用的脫氣方法有：低壓脫氣法（電磁攪拌、水泵抽空，可同時(shí)加熱或向溶劑吹氮?dú)猓⒋岛饷摎夥ê统暡摎夥ǖ取?/span>

3 梯度洗脫：用兩種（或多種）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動(dòng)相中溶劑的配比和極性，通過流動(dòng)相中極性的變化來改變被分離組分的分離因素，以提高分離效果。

4 高壓梯度（內(nèi)梯度）：特點(diǎn)是先加壓后混合。將溶劑用高壓泵增壓以后輸入色譜系統(tǒng)的梯度混合室，加以混合后送入色譜柱。低壓梯度（外梯度）：特點(diǎn)是先混合后加壓。在常壓下預(yù)先按一定的程序?qū)⑷軇┗旌虾笤儆帽幂斎肷V柱。

5 進(jìn)樣系統(tǒng)要求：良好的密封性，最小的死體積，最好的穩(wěn)定性，進(jìn)樣時(shí)對(duì)色譜系統(tǒng)壓力、流量影響較小。

6 分離系統(tǒng)：色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件。由柱管和固定相組成。柱管為直型不銹鋼管。一般色譜柱長(zhǎng)5~30 cm，內(nèi)徑4~5 mm，凝膠色譜柱內(nèi)徑3~12 mm，而制備色譜柱內(nèi)徑則可達(dá)25 mm。一般淋洗溶劑在進(jìn)入色譜分離柱之前，先通過前置柱。HPLC柱的填料顆粒粒徑一般約為3~10 ?m，填充常采用勻漿法。色譜柱的發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。

7 檢測(cè)系統(tǒng)：作用——用來連續(xù)監(jiān)測(cè)經(jīng)色譜柱分離后的流出物的組成和含量變化的裝置。紫外-可見吸收檢測(cè)器、光電二極管陣列檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、電化學(xué)檢測(cè)器。

8 高效液相色譜法對(duì)流動(dòng)相的要求：流動(dòng)相不與色譜柱發(fā)生不可逆化學(xué)變化，以保持柱效或柱子的保留性質(zhì)較長(zhǎng)時(shí)間不變；對(duì)待測(cè)樣品有足夠的溶解能力；與所用檢測(cè)器相匹配；粘度盡可能小，以獲得較高的柱效；流動(dòng)相純度要高，價(jià)格便宜，毒性小。

9 離子交換色譜法原理：離子交換色譜法的固定相是離子交換樹脂，流動(dòng)相是水溶液，它是利用待測(cè)樣品中各組分離子與離子交換樹脂的親和力的不同而進(jìn)行分離的。

10 離子交換色譜法流動(dòng)相：水的緩沖溶液。陰離子離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液；應(yīng)用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。

11 凝膠色譜法流動(dòng)相：能溶解樣品且與凝膠相似(潤(rùn)濕凝膠并防止吸附作用)、粘度小(增加擴(kuò)散速度)。常用四氫呋喃、苯、氯仿、水等。

12 影響分離的因素與提高柱效的途徑:

（1）液體的黏度比氣體大一百倍，密度為氣體的一千倍左右，故降低傳質(zhì)阻力是提高柱效主要途徑。

（2）由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。

（3）液相色譜中，不可能通過增加柱溫來改善傳質(zhì)。

（4）恒溫改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。

（5）流速大于0.5 cm/s時(shí), H～u曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實(shí)際操作中，流量仍是一個(gè)調(diào)整分離度和出峰時(shí)間的重要可選擇參數(shù)。

（6）氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項(xiàng)技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。

---本文摘自實(shí)驗(yàn)與分析